ABTS自由基清除能力检测试剂盒

英文名称：YC4770
产品编号：YC4770
产品类别：生化试剂盒
检测样本：组织

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50T/24S

￥ 6960 5

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ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：YC4770

规格：50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时雅吉工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体 60 mL×1 瓶	2-8℃保存
试剂一	液体 80 mL×1 瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1 瓶	2-8℃保存
试剂三	液体 20 μL×1 支	2-8℃保存
试剂四	液体 1.5 mL×1 支	-20℃保存
试剂五	粉剂×1 支	2-8℃保存

溶液的配制：

1 、试剂二：临用前加入 3 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反复冻融；

2 、试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前根据样本量按试剂三 (μL)：蒸馏水 (mL) = 1 μL:12 mL 的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在 4h 之内用完；

3 、试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四：试剂一 (V:V) = 1:9 的比例配成试剂四工作液，现配现用，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。

4 、试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有 5 mg 维生素 C 。临用前加入 2.8 mL 提取液，充分振荡溶解；配成 10 mmol/L 维生素 C 溶液，用于阳性对照。2-8 ℃可保存两周。

5 、 ABTS 工作液的配制：临用前根据样本量按试剂一：试剂二：试剂三工作液 (V:V:V) =76:5:4 的比例配成 ABTS 工作液，现用现配，室温避光保存，务必在 30 分钟内使用。

产品说明：

ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS 经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子 ABTS 自由基，在 405 nm 或 734 nm 处有最大吸收峰。被测物质加入 ABTS 自由基溶液后，所含抗氧化成分能与 ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色，405 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除 ABTS 自由基的能力。

ABTS H2O2、POD ABTS·+ (405 nm) Antioxidants ABTS

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理 (可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、植物组织样本的制备：将新鲜样本置于 60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎 (或粉碎机粉碎)，过 30~50 目筛；称取约 0.05 g 样本，加入 1 mL 提取液后置于 40℃水浴锅中浸提 30 min ；10000 rpm 室温离心 10 min ，取上清，置于冰上待测。

2 、红酒、果汁等液体样本：吸取 100 μL 样本溶液加入 900 μL 提取液，旋涡振荡混匀，室温 10000 rpm 离心

10 min ，取上清，置冰上待测。

3 、提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如 5 mg/mL。

注意：不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整 (如清除率大于 90% ，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于 5% ，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取)。

二、测定步骤

1 、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 405 nm ，蒸馏水调零。

2 、阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将 10 mmol/L 的维生素 C 溶液用提取液配制成 1 、0.8 、0.6 、0.4、

0.2、0. 1 mmol/L 的维生素 C 溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为 90%的阳性对照，则建议将 10 mmol/L 维生素 C 溶液用提取液配制成大于 1.5 mmol/L 的维生素 C 溶液待用。

序号	稀释前浓度 (mmol/L)	维生素 C 溶液体积 (µL)	提取液体积 (µL)	稀释后浓度 (mmol/L)
1	10	100	900	1
2	1	160	40	0 8
3	1	120	80	0.6
4	1	80	120	0.4
5	1	40	160	0.2
6	1	20	180	0.1

备注：实验中每个标准管需 50µL 维生素 C 溶液。

3 、操作表：在 EP 管中分别加入下列试剂：

试剂名称 (μL)	空白管	测定管	对照管	阳性对照管
上清液	-	50	50	-
不同浓度的 VC 溶液	-	-	-	50
蒸馏水	50	-	-	-
试剂四工作液	100	100	-	100
ABTS 工作液	850	850	-	850
试剂一	-	-	950	-
充分混匀，室温避光静置 6 min 。测定 405 nm 处的吸光度。分别记为 A 空白、A 测定、A 对照、A 阳性对

照，阳性对照标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

三、ABTS 自由基清除率的计算

1. 阳性对照的自由基清除率计算公式：

ABTS 自由基清除率 DVC% =[(A 空白-A 阳性对照)÷A 空白]×100%。

2. 样本的自由基清除率计算公式：

ABTS 自由基清除率 D% =[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100%。

注意事项：

1、不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的 ABTS 自由基清除能力，建议对于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物 (或者药物) 配制成同样浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度 (相同稀释倍数) 的清除率大小。