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批准文号： 兽药生字 154028082
通用名称：鸡新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名称：无
英文名称： Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen ，Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音：Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan，Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
抗原含有灭活的鸡新城疫病毒，血凝效价应≥1:512 。阳性血清为鸡新城疫高免的 SPF 鸡 血清， HI 效价应≥1:512。阴性血清为 SPF 鸡血清。
抗原为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解；阳性血清和阴性 血清均为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
用于血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体。
1 血凝(HA)试验操作方法
1.1 在 V 型微量反应板中，每孔加 0.025ml PBS 溶液。
1.2 第 1 孔加入 0.025ml 抗原，依次作 0.025ml 的对倍稀释至第 11 孔；为精确计算血凝 单位，病毒悬液开始需作一系列密集稀释，如 1/3 、1/4 、1/5 、1/6 等。
1.3 每孔加 0.025ml PBS 溶液。
1.4 每孔加 0.025ml 1% (V/V) 鸡红细胞悬液。
1.5 将反应板在振荡器上振荡 1~2 分钟或轻叩反应板混合反应物，室温(20~25℃)静置 15~30 分钟或2~8℃ 45~60 分钟，当对照孔的红细胞显著呈纽扣状时判定结果。
1.6 结果判定 将反应板倾斜 60°，观察红细胞有无呈泪珠样流淌，完全无泪珠样流淌(100% 凝集) 的最高稀释倍数为血凝效价。表示 1 个 HA 单位(HAU)，再根据开始的稀释倍数精确 计算血凝效价。
2 血凝抑制(HI)试验操作方法
2. 1 根据 HA 测定的效价，计算配制 4 个血凝单位(4HAU)抗原。
2.2 反应板中每孔加入 0.025ml PBS。
2.3 第 1 孔中加入 0.025ml 血清。
2.4 在反应板上将血清做横向 0.025ml 的对倍稀释，至第 10 孔。
2.5 在第 1 孔至第 11 孔中，每孔加入 0.025ml 的 4HAU 抗原，室温下(20~25℃)静置 30 分钟或 2~8℃ 45~60 分钟。
2.6 每孔加入 0.025ml 1% (V/V) 的鸡红细胞悬液，轻晃混匀后，室温(20~25℃)静置 20~40 分钟或 2~8℃ 45~60 分钟，当对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
2.7 结果判定 以完全抑制 4HAU 抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的 HI 效价。当阳性 血清的 HI 效价与已知效价误差不超过 1 个滴度， 阴性血清效价不高于 1:4 时，试验方可成立。 被检样品 HI 效价≤1:4 判为阴性；等于 1:8 判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥1:8 判为阳性， ＜1:8 判为阴性)；≥ 1:16 判为阳性。
(1) HA 和 HI 试验影响因素甚多， 应严格控制试验条件， 准确控制红细胞悬液和抗原工 作浓度，同时应严格控制温度和作用时间。
(2) 用 pH 值 7.0~7.2 的 PBS 作稀释液。
(3) 抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。
(4) 使用时应先测抗原的血凝价，根据所测结果，配制4 个血凝单位的抗原，配好后的抗原 应在2 小时内用完。
(5)抗原开封后 2~8℃保存， 应不超过 3 个月。切忌反复冻融。
抗原、阳性血清和阴性血清： (1) 1ml/瓶 (2) 2ml/瓶
2~8℃保存，抗原、阳性血清和阴性血清有效期均为 24 个月。
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