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考马斯亮蓝G250染料试剂

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产品简介:

考马斯亮蓝G250 染料试剂

Bradford 法是常用的蛋白浓度检测的方法,与传统方法相比,更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达 1M,DTT

 

的浓度可高达 5mM。但受高浓度的去垢剂的影响明显, 在用 Bradford Protein Assay Kit 行蛋白定量时,需确 SDS 低于 0.01%,Triton X-100低于 0.05%,Tween 20, 60, 80 低于 0.015%,含高浓度

 

去污剂的蛋白定量,建议采用 BCA Protein Assay Kit。

  

考马斯亮蓝 G250 染料试剂由考马斯亮蓝 G250、乙醇、磷酸组成,用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量,其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合

 

剂、还原性物质等均不排斥。检测浓度下限达到 25μ g/ml,最小检测蛋白量达到 0.5μg,待测样品体积为 120μl,在 50~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。

 

产品组成:

 

YS0010

 

YS0010

 

Storage

考马斯亮蓝 G250 染料试剂

100ml

500ml

RT

使用说明书

1 

自备材料:

1、酶标仪或分光光度计

2、蒸馏水

396 孔板或比色杯

 

操作步骤(仅供参考)

1稀释蛋白标准(一般 BSA 5mg/ml)使其终浓度 0.5mg/ml。注意:蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准也应用什么溶液稀释,也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释蛋白标准。

2、将标准品 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板的蛋白标准孔中,加蛋白标准稀释液补足至 20μl。

3、加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中,补加标准品稀释液至 20μl

4、各孔加入 200μl 考马斯亮蓝 G250 染料试剂,室温放置 3~5min

5、酶标仪测定 595nm 波长处的吸光值,560~610nm 之间的波长也可。

 


6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

 

注意事项:

1 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。

 

2、  需可检测 560~610nm 之间波长的酶标仪一台,最佳检测波长为 595nm

 

3 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定应每次都做标准曲线。

 

4 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但测定时,考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大考马斯亮蓝 G250 染料试剂的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应

 

按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

 

5、  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 12 个月有效。

 

 

 

 

 

 

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