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茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚比色法)

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 茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚比色法)

 

产品简介:

茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,是一类儿茶素为主体的黄酮化合物,儿茶素占 60~80%,具有 C6-C3-C6 碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化物质,能够清除自由基。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份之一,也是茶叶中有保健功能的主要成份之一,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶 90 和钴 60 迅速排出体外。

L 茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚比色法)参考国家标准 GB/T 8313 而来,其检测原理是利用福林酚氧化茶多酚中的酚羟基-OH,使其显蓝色,用分光光度计或酶标仪测定 765nm(或 600nm)处吸光度,在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比,与标准曲线比较,进而计算出茶多酚的含量,主要用于测定植物组织样品中茶多酚含量,尤其适用于茶叶。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途

 

产品组成:

ys1206

50T

Storage

试剂(A): 茶多酚标准(1mg/ml)

2ml

4℃ 避光

试剂(B): 福林酚试剂

6ml

4℃ 避光

试剂(C): TP 显色液

50ml

4℃

使用说明书

1 

 

自备材料:

1、茶叶、绿茶等待测样本、蒸馏水、甲醇

2、研钵200  目细胞筛、水浴锅或电炉

3、离心机、离心管或试管、比色皿、分光光度计

 

操作步骤(仅供参考)

1、准备样品:

①固体样品:称取 1g 植物样品,充分研磨成粉末,称取 0.2g 加入 10ml 离心管中,再向其中加入在 70℃水浴中预热的 70%甲醇水溶液 5ml,盖紧并使样品湿润,立即放入 70℃水浴中浸提 10min(每隔 5min 晃动 1 浸提后冷却至室温,3500r/min 离心

 


 

10min,转移上清液至 10ml 容量瓶,向样品残渣再加入 5ml 70%甲醇水溶液浸提一次,重复上述操作,合并上清液并定容至 10ml,摇匀,即为茶多酚提取液;4℃避光保存,用于茶多酚的检测。

②绿茶、血浆、血清和尿液等液体样品:绿茶样品可直接用该试剂盒测定,血浆、血清按照常规方法制备后可直接用本试剂盒测定。

2、配制系列茶多酚标准:用蒸馏水和茶多酚标准(1mg/ml),按下表进行操作,依次稀释。

加入物(μl)

1

2

3

4

5

6

7

茶多酚标准(1mg/ml)

5

10

20

40

60

80

100

蒸馏水

995

990

980

960

940

920

900

相当于茶多酚含量(μg/ml)

5

10

20

40

60

80

100

3、配制福林酚工作液:按照福林酚试剂:蒸馏水=1:9  的比例,现配现用,不宜长期保存。

4TP 加样:取 96 管板,按照下表设置空白管、对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TP 浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置 2 平行管,求平均值。

 

加入物(ml)

空白管

标准管

测定管

蒸馏水

0.5

系列茶多酚标准(1~7 )

0.5

待测样品

0.5

福林酚工作液

1

1

1

摇匀,反应 5~8min,加入 0.8ml TP 显色液,摇匀,室温下放置 60min

5TP 测定:以空白管调零,1cm 比色皿,分光光度计测定 765nm(或 600nm)处各标准管、测定管的吸光度。

 

计算:

以系列茶多酚标准浓度(1~7 )( 5、10、20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程;以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中 TP 含量。

固体样品 TP 含量(μg/g)= (C×VT×N)/W

式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml) VT=提取液的总体积(ml) =10ml

W=固体样品的质量(g) =0.2g N=提取液的稀释倍数

液体样本 TP 含量(μg/ml)= C×N



式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)

N=提取液的稀释倍数

 

注意事项:

1、茶多酚提取液宜 4℃避光保存,且保存时间在 24h 以内。

2、福林酚有一定的腐蚀性,请小心操作。

3、样品中茶多酚浓度过高,颜色反应将特别深,超出仪器的检测范围,应用蒸馏水适当稀释重新检测。

4、该试剂盒测定标准品时,肉眼可见,浓度小 10μg/ml 呈浅蓝色,20~60μg/ml 呈蓝色,大于 80μg/ml 时呈深蓝色。

 

附录:参考标准曲线范围: Leagene 测定茶多酚标准在 5、10、20、40、60、80、100 μg/ml 时的吸光度,据此作出其参考标准曲线如下:

 

 

 

注意:由于检测仪器和操作手法等条件的不同,参考值范围会有波动,该值仅供参考

 

有效期:6  个月有效;4℃运输,4℃保存。

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