试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
1. 所购产品均质量保证！
2. 试剂盒方面提供技术指导，Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量，除以下情况，客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货：
1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
四环素类检测试剂盒使用说明书
（酶联免疫法）
1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法检测组织、蜂蜜、鸡蛋、
尿样等样本中的四环素类药物（
Tetracyclines，TCs），试剂
盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品
及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本
中的四环素类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗四环素
类药物抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色，样本吸光度
值与其所含四环素类药物含量成负相关，与标准曲线比较即可
得出样本中四环素类药物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.3ppb(ng/ml)
2.2 反应模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 检测下限：
组织、肝脏、鸡蛋………………12ppb
蜂蜜………………………………12ppb
尿样………………………………3ppb
牛奶………………………………12ppb
奶粉………………………………24ppb
2.4 交叉反应率：
四环素………………………………100%
金霉素………………………………340%
土霉素………………………………51%
强力霉素……………………………8.5%
2.5 样本回收率：
组织、肝脏、鸡蛋…………75±20%
蜂蜜…………………………80±20%
尿样…………………………80±20%
牛奶、奶粉…………………75±20%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96 孔
高浓度标准品溶液 1 瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高标准液有
挥发性，需注意密封）
标准品溶液 0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、
24.3ppb（均为空瓶子，现配现用）。
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液 A（白盖）……………………6ml
底物液 B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20×浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
5×复溶液（黄盖） …………………50ml
说明书…………………………………1 份
盖板膜…………………………………1 张
自封袋…………………………………1 个
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡
器、离心机、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器：单道 20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 试剂：浓盐酸、无水甲醇
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实
验结果。
5.2 配液：
配液 1：复溶液
将 5×复溶液用去离子水 5 倍稀释（
1 份 5×复溶液加 4 份
去离子水），用于样本的复溶，复溶液在 4℃环境可保存一个月。
配液 2：工作洗涤液
将浓缩洗涤液 20 倍稀释(1 份洗涤液加 19 份去离子水)。
配液 3：样本提取液
取 4.3mL 浓盐酸加去离子水混匀，定容至 50mL，再加入
450ml 无水甲醇。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 组织、肝脏、鸡蛋样本处理方法
1）准确称取 1±0.05g 均质后的样本于离心管中，加入 2ml 样
本提取液（配液 3），剧烈振荡 2min，使样本彻底分散，充分
与有机相接触，室温 4000 转/分以上，离心 5min；
2）取出 50ul 上层液体（样本脂肪多会有白色漂浮物，不要取
到）,加入 950ul 复溶液混匀；
3）取 50 µl 用于分析。
样本稀释倍数：40
检测下限：12ppb
5.3.2 蜂蜜样本处理方法
1）准确称取 1±0.05g 蜂蜜样本于离心管中，加入 1ml 样本提
取液（配液 3），振荡混匀 2min，使蜂蜜充分溶解；
2）取出 50ul 混合液,加入 950ul 复溶液混匀；
3）取 50µl 用于分析。
样本稀释倍数：40
检测下限：12ppb
5.3.3 尿样本的处理方法
1）用复溶液将尿样 10 倍稀释（如果尿样浑浊一定要过滤或离
心 10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本
应冷冻保存。
2）取 50µl 稀释的尿样用于分析。
样本稀释倍数：10
检测下限：3ppb
5.3.4 牛奶样本处理方法
1）准确吸取 1ml 牛奶于离心管中， 加 2ml 样本提取液（配液
3），振荡 2min，室温 4000 转/分以上，离心 5min；
2）取 50ul 上层液，加入 950ul 复溶液，混匀；
3）取 50µl 用于分析。
样本稀释倍数：40
检测下限：12ppb
5.3.5 奶粉样本处理方法
1）准确称取 1±0.05g 奶粉于离心管中，加入 4ml 样本提取液
（配液 3），振荡 2min，室温 4000 转/分以上，离心 5min；
2）取 50ul 上层液，加入 950ul 复溶液，混匀；
3）取 50µl 用于分析。
样本稀释倍数：80
检测下限：24ppb
6 酶联免疫试验步骤产品缩写：TCs
货号：E102001
版本：2022.1
2
将所需试剂从 4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡 30min
以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，
每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框
架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
实验开始前需配制标准品应用液；低浓度的标准品不稳
定，需现配现用。
在 0ppb 的瓶中加复溶液 3ml，0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、
8.1ppb 的瓶中分别加复溶液 2ml，24.3ppb 的瓶中加复溶液
2.93ml。
标准液 6：取 1.0ppm 高浓度标准品溶液 73ul 加入装有
2.93ml 复溶液 24.3ppb 的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为 24.3ppb。
标准液 5：取 1ml 标准液 6 加入装有 2ml 复溶液 8.1ppb
的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为 8.1ppb。
标准液 4：取 1ml 标准液 5 加入装有 2ml 复溶液 2.7ppb
的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为 2.7ppb。
标准液 3：取 1ml 标准液 4 加入装有 2ml 复溶液 0.9ppb
的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为 0.9ppb。
标准液 2：取 1ml 标准液 3 加入装有 2ml 复溶液 0.3ppb
的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为 0.3ppb。
标准液 1：直接使用复溶液，浓度即为 0ppb。
6.1 编
号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本
和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品应用液或样本 50µl/孔到各自的微孔
中，然后加抗体工作液 50µl/孔，轻轻振荡 5 秒混匀，37℃避
光反应 30 分钟。
6.3 洗
涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加 350ul
工作洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，最后一次拍
干。（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头
刺破）。
6.4 加酶反应：加酶标记物 100µl/孔，37℃避光反应 30 分钟。
6.5 洗
涤：同上
6.6 显
色：加底物液 A 50µl/孔，再加底物液 B 50µl/孔，
轻轻振荡 5 秒混匀，37℃避光显色 15 分钟（若蓝色过浅，可
适当延长反应时间）。
6.7 终
止：加终止液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于 450nm 处测定每孔吸光度值（建议
用双波长 450/630nm）。测定应在终止反应后 10 分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸
光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（
0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%）＝ A ×100% A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb 标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（
ppb）
的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分
吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓
度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的
准确、快速分析。（欢迎来电索取）
8 注意事项
8.1 室温低于 25℃或试剂及样本没有回到室温（
25℃）会导致
所有标准的 OD 值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲
线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行
下一步操作。
8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在 ELISA 分析中的再现性，很
大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试
剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 标准的吸光
度值小于 0.5 个单位（
A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于 2-8℃保存，避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为 1 年，生产日期见包装盒。
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