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产品简介：基底膜是动物体内上皮细胞基底面的一层基质膜。是从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠肿瘤组织提取的基底膜成分，所形成的基质胶。该基质胶主要成分为laminin，collagen IV，heparan sulfate proteoglycans（Kleinman et al. 1986）。同时，该基质胶也包含多种生长因子，例如表皮生长因子EFG，血小板衍生生长因子PDGF，神经生长因子NGF，碱性成纤维细胞生长因子FGF-2，乙型转化生长因子TGF-beta和胰岛素样生长因子ILGF（Vukicevic et al. 1992）。
产品来源：
Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠肿瘤基底膜成分
产品储存：
建议您融化后先按照单次用量进行分装，保存-20°C冰箱，有效期2年。
产品性质：
本品在4°C条件下为液态，但在加热到37°C时呈凝胶状态。基质胶凝固后，重新放回4°C过夜，基质胶可再次液化。
注意事项：
该基质胶在温度高于10°C时就会开始凝固成胶，所以尽量在冰上操作基质胶。类器官传代时，如果为了避免酶对类器官造成影响，可直接用4°C预冷的基础培养基对基质胶进行缓慢吹打，即可将类器官从基质胶中释放出来。
产品应用：
本品适用于类器官生长、分化、代谢和毒理学研究，体内和体外血管生成实验。
操作方法：
一、肿瘤类器官药敏实验（操作所需时间为2小时）
1.将扩增好足够量的肿瘤类器官（实验组）以及正常类器官（对照组）用4°C预冷的基础培养基进行重悬，缓慢机械吹打，促进胶液化溶解，并保持类器官结构完整（可用于悬浮培养于有5%基质胶溶液的基质胶表面）（Guillen et al. 2022）。或者通过TryplE酶消化获得单细胞悬液。
2.离心收集类器官细胞，并进行细胞计数。
3.加入LYN基质胶原液，与细胞进行混匀。
4.将细胞与胶的混合物，通过排枪加入37°C预热过的96孔板，或者384孔板，立即将孔板放入培养箱。
5.大约10min后，基质胶将凝固，加入相应体积的类器官培养液进行培养。
6.类器官形成后（如果是机械吹打，类器官将在传代24h后就会形成；如果是酶消化，类器官会在3-5天后形成），每个孔分别加入含有PI染料以及不同种类、不同浓度的待筛选的抗肿瘤药物。
7.用高内涵显微镜上进行活细胞成像，测定肿瘤类器官对各种药物的敏感性。
二、血管生成实验（以永生化HUVEC细胞系为例，操作所需时间为1小时）
1.将完全培养基换成饥饿细胞用培养基：加入含0.2% FBS，2mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，100U/ml青霉素和100µg/ml链霉素的DMEM培养基培养24小时。
2.将基质胶均匀铺满96孔板底。注意：枪头需提前预冷半小时。尽量在冰上操作，避免基质胶过早固化，避免气泡产生。
3.将96孔板在细胞培养箱孵育30min，固化基质胶。
4.消化HUVEC细胞，并计数。
5.将200µL的HUVEC细胞悬液（含5X10^4个细胞）加于含基质胶的96孔板中。将96孔板放于培养箱。
6.血管样网络结构将于3至12小时间形成。
7.在血管网络形成时，小心去除培养基，并用加入含活细胞染料1/1000 Calcein AM（绿色）的培养基进行染色，并用显微镜进行拍照记录。
三、神经轴突3D生长实验（以大鼠胚胎神经干细胞为例，操作所需时间为2小时）
1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科镊分离出大脑皮层于4°C预冷的DMEM培养基中。
2.用吸管轻缓吹打，然后用70µm滤网过来，获得单细胞悬液，并进行细胞计数。
3.离心（300g，3min），弃上清。将细胞与基质胶进行混合，然后将基质胶混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。
4.将24孔板放于培养箱，大约10min后，基质胶将凝固。加入1mL神经元分化培养基：Neurobasal medium，2% B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天开始，就能观察到有明显的神经轴突生长。
5.在第7天可观察到大量的神经突（Neurite）长出。
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