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AccurPrime RCA滚环扩增试剂盒

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AccurPrime RCA Kit采用引发酶(AccurPrimase Pol)来产生扩增引物,其与TruePrime RCA Kit 采用的Tth PrimPol Primase工作原理相似,这种不使用Random Hexamers(随机引物)的扩增方式,确保了对模板的精准扩增,避免引物带入的不确定碱基。Primase Pol结合在ssDNA上,以dNTP为底物合成短的互补引物,随后在高保真和持续合成能力极强的Equi-phi29 DNA聚合酶的作用下,持续合成ssDNA,其新合成的ssDNA又可以作为Primase Pol的结合底物重新合成互补引物,进而继续进行扩增,形成dsDNA。

该试剂盒中配备了dsDNA变性液(Buffer D),因此无论是ssDNA还是dsDNA均可以有效的作为扩增底物。以1ng的环状质粒模板,在2h内可以获得3 μg的扩增产物。以10 ng的genomic DNA(100-200kb)为模板,可获得1-2 μg的产物。扩增终产物为大分子量的网状dsDNA,其可用于酶切、测序与再连接。

产品描述:AccurPrime RCA Kit 与 TruePrime RCA Kit 工作原理相同,采用引发酶(Primase Pol)来产生扩增引物。这种不使用 Random Hexamers(随机引物)的扩增方式,确保了对模板的精准扩增,避免引物带入的不确定碱基。PrimasePol 结合在 ssDNA 上,以 dNTP 为底物合成短的互补引物,随后在高保真和持续合成能力极强的 Equi-phi29 DNA 聚合酶的作用下,持续合成 ssDNA,其新合成的 ssDNA 又可以作为 Primase Pol 的结合底物重新合成互补引物,进而继续进行扩增,形成 dsDNA。该试剂盒中配备了 dsDNA 变性液(Buffer D),因此,无论是 ssDNA 还是 dsDNA 均可以有效的作为扩增底物。以1 ng 的环状质粒模板,在 2h 内可以获得 3 μg 的扩增产物。以 10 ng 的 genomic DNA(100-200kb)为模板,可获得1-2 μg 的产物。扩增终产物为大分子量的网状 dsDNA,其可用于酶切、测序与再连接。
储存:-20℃可保存 2 年。
注意:10×phi29 Buffer、Buffer D(变性液)、Buffer N(中和液)含有高浓度的盐,实验时务必做好防护。皮肤和眼睛接触后,立即大量清水清洗,并就医。
操作方法
1. 模板变性与中和
Template DNA(0.01-10 ng/μl) 2.5 μlBuffer D 2.5 μl漩涡混合均匀后,室温放置3min后,立即加入2.5μl BufferN 进行中和(此时总体积为 7.5μl)。
注意:
(1)模板 DNA 可以是纯化的质粒、gDNA、菌液、培养细胞
(2)变性反应采用碱变性方法,因此变性时间不宜超过 5min,过长的时间会造成模板损伤。
2,扩增发应:
漩涡混合均匀后,放置于 30℃恒温扩增 2h。必要情况下,65℃10min 进行失活反应。产物 4℃短期保存(<3 天),或-20℃长期保存。
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