柱式病毒RNAOUT

英文名称：Column Viral RNAOUT
产品编号：71001-50
产品类别：核酸扩增/纯化

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50T

￥ 1200 10

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产品简介：

采用特异性结合病毒 RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒RNA 提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒 RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒 RNA 的提取要求，如病毒 RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和 HTLV（人类嗜 T 淋巴细胞病毒）；等等。病毒裂解后，RNA 后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒 RNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸

无杂质和 PCR 抑制剂，可直接适用于 PCR/RT-PCR 等分析。

它具有下列特点：

1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在 20 分钟内完成。

3. 多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒 RNA 纯度高，质量稳定可靠，可

适用于各种常规操作，包括 PCR/RT-PCR 等。

使用步骤：

第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇!

1.200μl 血清等体液（需回复到室温，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入上述1.5ml 离心管，加入 400μl 裂解液 RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。

2.室温(15-25℃)放置 10 分钟，每隔 5 分钟，振荡混匀一次。

3.加入 450μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

4.将上述混合物加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心 30-60秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过 750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱 RA 中。

5. 加 500μl 去蛋白液 RE，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。

6. 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 秒，弃废液，加入 500μl 漂洗液 RW，重复一遍。

7. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

8. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 的离心管中，在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free H20（事先在 65－70℃水浴中加热效果更好），室温放置 1 分钟，

12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要 RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于 20μl，体积过小降低洗脱效率，减少 RNA 产量。

9. RNA 病毒建议最好立刻使用，否则立刻短期放置在-70℃备用。

注意事项：

提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难？

A：原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子，每种RNA 有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测 OD 检测，只能通过PCR 或 RT-PCR 检测，而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。