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pDG1730质粒

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质粒宿主: 枯草杆菌
质粒用途: 蛋白表达
片段类型: ORF
片段物种:  
原核抗性: Amp
筛选标记: Ery,Spe
荧光标记:  
启动子:  
复制子:  
拷贝数:  
感受态: Stbl3
温度: 37度

 

一、扩增流程

收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

(一)干粉质粒

产品规格:0.5μg质粒干粉,保证能转化出来,不保证具体含量,请务必先转化进感受态,再挑单菌落提取后再使用。

保质期限:90天,请尽快转化。

保存温度:一般在-20°C,置于-80°C保存时间更长。

运输方式:常温运输,1周内。

注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗性、抗性浓度、感受态名称和培养温度。

使用说明:

1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

2、从-80°C冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

4、42°C热激90s,再冰浴2min;

5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

6、6000rpm离心5min,仅留100μl上清混匀菌体沉淀;

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

注意:如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

(二)甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)

产品规格:甘油菌种。

保质期限:90天,请尽快划线培养。

保存温度:-80℃。

运输方式:冰袋运输,1周内。

注意事项:培养前请准确查找该菌种的抗性、抗性浓度和培养温度。

使用说明:

1、收到甘油菌种后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;

2、用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性就加对应抗性;

3、恒温培养箱倒置培养12~16h;

4、挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性就加对应抗性;

5、摇床震荡培养12~16h,根据实验需要保存甘油菌,酵母加30% 甘油,其它一般加15%甘油。

注意:务必要四区划线挑单菌落培养。

(三)穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)

穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。

4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)

直接挑取单菌落至液体培养基中。

5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)(强烈推荐委托我们大提)

单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,保质期90天,请务必先转化提质粒后使用)

收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

7、常用抗生素推荐浓度:

 

二、转化图片

 

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