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人视网膜周细胞HRMVPCS永生化

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细胞名称

人视网膜周细胞-永生化

货号

YS0878

种属

组织来源

视网膜

永生化方法

转入 Sv40 

生长方式

贴壁

安全性

和病的细为有危害级生台内作,并请注意防护

 

 

 

 

人视网膜周细胞培养

培养基:DMEM 高糖+10%胎牛血清+1%双抗

 配套培养基:(YS-120

温度:37

气相:95%空气,5%二氧化碳

 

 

 

 

 

 

 

 

人视网膜周细胞传代

收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓

冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

(一细胞未长至 85% 75%酒精喷洒整个瓶消毒后到生物操作台严格无

菌操作,打开细胞培养瓶,若培养瓶上无特殊标注,吸去剩余培养液,只留 6-8ml

养液继续培养。

(二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:

1.弃去培养液,用 PBS 洗涤 1-2 次,

2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、

透亮轻拍甁壁呈流沙样脱落则迅速拿回操作加入双倍的含 10%血清的完全培

养液,终止消化并轻轻吹打细胞,使其变成单细胞悬液,

3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散,

4.加入新鲜培养液重悬细胞,进行传代、冻存,

5.如果没有特别说明,建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2

1.观察细胞密度最好用(4X物镜)低倍镜观察,以便正确的判断细胞密度;观

察细胞形态请用(10X  20X)高倍镜观察;

2.瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养;

3.有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内;

4.收到细胞后,若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染,请及时与我们联系。

人视网膜周细胞保存

冻存条件:70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO 

保存条件:液氮

供应限制

供研究之用

常见问题

1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师

  

解决。

2.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底表明细胞活力正常剩余漂浮的细胞可以去 8-10ml 培养液培养观察,细胞生长至汇合度 85-95%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁, 将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我 们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。

解决方案

 

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