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彩虹预染蛋白Marker II(3-40kD)
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II(3-40 kD)
● 储存条件:
-20℃保存,有效期12个月
● 产品简介:
彩虹预染超低分子量蛋白质Marker II可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。
本产品由9种多肽和蛋白质组成,分子量大小为 3 kD,4.2 kD,6.5 kD,10 kD(绿色),15 kD,20 kD,25 kD,30 kD,40 kD(红色)
(注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过)。
● 使用说明:
第一次收到该产品,常温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底。
一. 制胶:
I 配制分离胶
1.按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的无水乙醇,使凝胶表面保持平整。
4.静置15-30分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 (一块1 mm mini胶用量)
| 分离胶 | 浓缩胶 |
| 18%T, 5%C /5 ml | 5%T, 3.3%C/2 ml |
40% PAA(19:1) | 2.25 ml | / |
40% PAA (29:1) | / | 0.25 ml |
4×凝胶缓冲液 | 1.25 ml | 0.5 ml |
乙二醇(电泳级) | 1.5 ml | / |
ddH2O | / | 1.25ml |
10%APS | 50 μl | 20 μl |
TEMED | 5 μl | 2 μl |
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留乙醇吸去。
1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
4.静置30-60分钟装待凝胶聚合
二. 电泳:
1. 取Marker样品,充分混匀后备用。不要加热处理。
2. 电泳前,将10×阳极缓冲液和10×阴极缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液,内槽加入1×阴极缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔,参考下表进行电泳,至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
表二 多肽电泳条件
恒电压 | 150V |
起始电流 | 60-75mA/板胶 |
结束电流 | 15-25mA/板胶 |
电泳时间 | 2.5-3小时 |
三. 染色
根据常规实验步骤,用配方6和7(表三:随货说明书)进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择购买本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(YS6201),该产品除具有染色快,无毒,灵敏性高等特点外,还能对小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。
注:预染蛋白Marker由于嵌合了染料,在不同的凝胶系统中迁移率会有不同,因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小,请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。
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