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彩虹预染超低分子量蛋白质Marker III（1.5-45 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III（1.5-45 kD）
● 储存、运输及效期：
-20℃保存，湿冰运输，有效期1年。
● 产品简介：
彩虹预染超低分子量蛋白质Marker III可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品由7种多肽和蛋白质组成，分子量大小为 1.5 kD，4 kD（红色），8 kD， 15 kD（绿色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。)
● 使用说明：
第一次收到该产品，常温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底。
一. 制胶：
说明：可以根据以下步骤自己制备凝胶。也可以选择购买我司Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒进行实验。
1.1 配制分离胶
1.1.1 按照表1将组份加入到小烧杯中混合。
1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
1.1.3 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可（注：此溶液为过量，请勿全部注入）。然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。
1.1.4 静置15-30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。分离胶25℃条件下，约20分钟可以聚合。
表1 （一块1 mm mini胶用量）
|
| 分离胶 | 浓缩胶 |
|
| 18％T, 5%C /5 ml | 5％T, 3.3%C/2 ml |
| 40% PAA（19:1） | 2.25 ml | / |
| 40% PAA (29:1) | / | 0.25 ml |
| 4×凝胶缓冲液 | 1.25 ml | 0.5 ml |
| 乙二醇（电泳级） | 1.5 ml | / |
| ddH2O | / | 1.25ml |
| 10％APS | 50 μl | 20 μl |
| TEMED | 5 μl | 2 μl |
1.2 配制浓缩胶
1.2.1 去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留乙醇吸去。
1.2.2 按照表1将各组份加入到小烧杯中混合。
1.2.3 加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
1.2.4 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.2.5 静置30-60分钟装待凝胶聚合
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。浓缩胶25℃条件下，约40分钟可以聚合。
二. 电泳：
2.1 取Marker样品，充分混匀后备用。不要加热处理。
2.2 电泳前，将10×阳极缓冲液和10×阴极缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，参考下表进行电泳，至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
表2 多肽电泳条件
| 恒电压 | 150V |
| 起始电流 | 60-75mA/板胶 |
| 结束电流 | 15-25mA/板胶 |
| 电泳时间 | 2-3小时 |
三. 染色
根据常规实验步骤，用配方6和7（表3：参考随货说明书）进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液，该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
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