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Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++(GVB++)
概述
GVB⁺⁺是一种含有镁离子(Mg²⁺)和钙离子(Ca²⁺)的等渗缓冲液,专为补体经典途径和凝集素途径的实验设计。它能够维持补体系统的活性,适用于抗体致敏羊红细胞(EA)的制备以及补体相关实验的试剂稀释。
主要成分
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明胶(Gelatin):0.1%,防止蛋白质吸附。
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Veronal缓冲液:5 mM,提供稳定的pH环境。
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氯化钠(NaCl):145 mM,维持等渗条件。
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镁离子(Mg²⁺):支持补体替代途径的激活。
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钙离子(Ca²⁺):支持补体经典途径和凝集素途径的激活。
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叠氮化钠(NaN₃):0.025%,抑制细菌生长。
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pH值:7.3,适合补体系统的活性维持。
物理特性
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外观:透明液体,可能因明胶的存在在低温下形成轻微凝胶状物质。
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溶解性:明胶在37℃或微波加热后可完全溶解。
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储存条件:2-8℃保存,避免冻结。
应用
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抗体致敏羊红细胞(EA)的制备:
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使用GVB⁺⁺缓冲液制备EA,并在实验前清洗以去除未结合的抗体。
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补体经典途径和凝集素途径实验:
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用于稀释补体成分、抗体致敏红细胞及其他实验试剂。
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补体活性测定:
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作为反应缓冲液,维持补体系统的活性。
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使用说明
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EA制备:
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将羊红细胞与特异性抗体在GVB⁺⁺中孵育,形成EA。
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使用GVB⁺⁺清洗EA,去除未结合的抗体。
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实验试剂稀释:
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使用GVB⁺⁺稀释补体成分、EA及其他试剂,确保实验条件一致。
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补体活性测定:
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在GVB⁺⁺中进行补体经典途径或凝集素途径的反应,测定补体活性。
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注意事项
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明胶溶解:若缓冲液在低温下形成凝胶状物质,需加热至37℃或微波加热溶解后使用。
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细菌污染:叠氮化钠可抑制细菌生长,但仍需无菌操作以避免污染。
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储存条件:避免冻结,2-8℃保存,使用前恢复至室温。