试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
1. 所购产品均质量保证！
2. 试剂盒方面提供技术指导，Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量，除以下情况，客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货：
1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
组织活性氧(ROS)检测试剂盒
注 意：
1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；
2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；
测定意义：
活性氧(reactive oxygen species, ROS)是植物体内的一把“双刃剑”。ROS作为信号分子在植物生命活动中发挥关键作用, 但ROS过量积累会造成氧化损伤，测定ROS含量对于评估植物细胞内的氧化还原状态至关重要。
测定原理：
ROS荧光探针是一类无色、无荧光的染料分子，利用化学荧光指示剂即荧光探针:2',7-Dichlorofluorescin Diacetate，(DCFH-DA),在细胞内与ROS发生反应后生成具有强荧光的产物，通过检测产物的荧光强度可在一定程度上反映组织内的活性氧，这种荧光信号在激发波长488nm和发射波长525nm处有最大波峰，其荧光强度和活性氧水平成正比。
自备仪器和用品：
荧光酶标仪、黑色96孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵/匀浆器、300目尼龙网、冰和蒸馏水。
试剂清单：
| 试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 | 备注 |
| 提取液 | 液体 150mL | x1 | 4°C |
|
| 试剂一 | 液体 | x1 | -20°C | 低温时可能出现结晶现象，使用前室温震荡溶解即可 |
样本处理（按照步骤依次操作）：
一、组织样品
1. 直接匀浆提取法：
称取约0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4°C离心10min取上清待测，建议提取后尽快反应测定。
2. 网搓法：称取0.1组织立即放入预冷的提取液中，清洗处理干净后，将组织块剪成厚度小于1mm薄片，放在预冷提取液中进行漂洗。将300目尼龙网扎在小烧杯上，将剪碎的组织放在网上，用镊子等轻搓组织块，边搓边用提取液冲洗， 直至将组织搓完。收集细胞悬液，500g，4℃离心10min，去上清留沉淀，并用提取液洗1～2次。
3. 酶解法：
使用酶解液制备组织原生质体（需要自行处理）
二、液体样本
澄清样本可直接检测，若浑浊则离心取上清检测；
实验准备：
1、荧光酶标仪预热30min，设定激发波长488nm，发射波长525nm；
2、所有试剂解冻至室温（25°C）
测定操作：
1、在黑色96孔板中依次操作
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 |
| 试剂一 | 2 | 2 |
| 样本 | 200 |
|
| 提取液 |
| 200 |
| 混匀，37°C避光孵育30min后于激发波长488nm，发射波长525nm处读取荧光值F。荧光强度=F测定-F空白 | ||
注意：
1、若荧光值较小（小于200Au），可以增加37C孵育反应时间T(如增至1小时)，或增加试剂一(由 2μL 增至5μL)；改变后的T需代入公式重新计算。
若荧光值较大（大于4000Au），可以减少37℃孵育反应时间T(如减至10min)，或稀释试剂一(稀释5~10倍)；改变后的T需代入公式重新计算。
结果计算：
1、按照样本质量计算:
活性氧强度定义:每克组织每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。
活性氧强度=荧光强度÷T÷W×V
2、按照样本蛋白浓度计算:
活性氧强度定义:每毫克组织蛋白每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。
活性氧强度=荧光强度÷T÷Cpr×V
3、按照液体体积计算:
活性氧强度定义:每毫升液体每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。
活性氧强度=荧光强度÷T÷V1
T：反应时间，30min；
V：加入提取液体积，1ml
W：组织重量，g
Cpr：蛋白浓度，mg/ml;可使用本公司蛋白含量试剂盒测定
V1：测定加入样品体积，0.2ml
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